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热敏型细菌UDG酶来源于嗜冷海洋细菌(psychrophilic marine bacterium) BMTU3346，可催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的单链或双链DNA，但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。

UDG主要应用于消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题。其防止污染的原理为：在PCR反应中加入适量的dUTP，以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成含dU碱基的PCR扩增产物；后续进行PCR反应时，使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA，从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。

本制品为热敏型，在50℃孵育10分钟可以迅速不可逆灭活。在PCR或RT-PCR反应前，PCR或RT-PCR体系中加入Heat-labile Bacterium UDG室温处理10min，即可充分消除可能的之前的含有dUTP的PCR扩增产物的污染。本制品不仅适用于PCR，也适用于qPCR、RT-PCR和qRT-PCR等体系。

Heat-labile Bacterial UDG酶活性鉴定结果可参考图1。

图1.百奥莱博和N公司的Heat-labile Bacterial UDG催化酶解5μL含dU碱基的PCR扩增产物效果图。使用本制品或国外N公司的酶，在20μL体系，分别以5μL含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物和不同量的(0U,0.0313U,0.0625U,0.125U,0.25U,0.5U) Heat-labile Bacterial UDG，在1×HL Bacterial UDG Buffer，37℃孵育30min，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本制品与N公司相比，具有相当的酶活。

Heat-labile Bacterial UDG酶经灭活处理后酶活鉴定结果可参考图2。

图2.百奥莱博和N公司的Heat-labile Bacterial UDG以及百奥莱博的E.coli UDG (YTB4034)经50℃10min处理后，催化酶解5μL含dU碱基的PCR扩增产物效果图。将不同量的E.coli UDG (0U,0.005U,0.01U,0.025U)和百奥莱博以及N公司不同量的Heat-labile Bacterial UDG (0U,0.0625U,0.125U,0.25U)经50℃处理10min之后，在20μL体系，分别以5μL含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物，在1×HL Bacterial UDG Buffer，37℃孵育30min，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，E.coli UDG 50℃处理10min之后酶活仅轻微下降，而百奥莱博和N公司的Heat-labile Bacterial UDG均完全灭活。


去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基；去除含dU的PCR产物气溶胶污染；在二代测序(NGS)应用中，主要用于mRNA定向测序文库的构建；用于提高定向诱变方法的效率和用来获得高度标记的寡核苷酸探针；用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR体系。


One unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the release of 60pmol of uracil per minute from double-stranded,uracilcontaining DNA.Activity is measured by release of [³H]-uracil in a 50μL Standard Taq Reaction Buffer containing 0.2μg DNA (10⁴–10⁵ cpm/μg) in 30minutes at 37℃.

组分	100U	500U
Heat-labile Bacterial UDG(1U/μL)	100μL	500μL
10×HL Bacterial UDG Buffer	500μL	2.5mL

保存：-20℃，至少一年有效。


20mM Tris-HCl (pH7.5),50mM NaCl,0.1mM EDTA,1mM DTT,50% (v/v) glycerol。


大肠杆菌重组、表达和纯化而获得。


不含UDG酶活力之外的内切或外切脱氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。


10×HL Bacterial UDG Buffer：
100mM Tris-HCl,500mM KCl,15mM MgCl₂,pH8.3 at 25℃。


50℃加热10分钟可以使Heat-labile Bacterial UDG完全失活。

• Heat-labile Bacterial UDG酶在大多数PCR或RT-PCR体系中均具有活性，但对于自行使用的PCR或RT-PCR体系，首次使用时建议先测试一下是否和所使用的体系兼容。通常取含dUTP的PCR扩增产物，参考图1加入适量UDG，观察能否有效降解含dUTP的PCR扩增产物。本制品会被高离子强度(>100mM)所抑制。
  
• Heat-labile Bacterial UDG酶对双链DNA的活性低于对单链DNA的活性，对小的U-DNA寡核苷酸和dUMP有活性，但对RNA或正常的不含dUTP的DNA没有活性。
  
• Heat-labile Bacterial UDG酶活对于金属离子没有依赖性，在Mg²⁺或EDTA的存在情况下均具有活性。
  
• 由Heat-labile Bacterial UDG酶消化产生的DNA链的无碱基位点可通过加热，碱处理或核酸内切核酸酶处理而除去。通常PCR反应过程中的加热步骤可以确保UDG酶消化的位点被完全剪切开。
  
• Heat-labile Bacterial UDG酶可以在PCR反应前清除不慎污染的含dUTP的PCR产物，从而避免由于污染导致的PCR假阳性结果。
  
• 如果需要将Heat-labile Bacterial UDG酶应用于One-Step RT-PCR或者One-Step qRT-PCR体系，需要选择耐热反转录酶，并需要将逆转录温度设置为50～55℃。

• 按照常规反应体系设置PCR或RT-PCR反应体系，同时加入Heat-labile Bacterial UDG至最终浓度为0.02U/μl，混匀。通常仅加入PCR或RT-PCR的buffer即可，无需加入UDG的buffer。
  
• 25℃孵育5～10min (去除可能的含dUTP的PCR扩增产物的污染)，随后进入PCR或RT-PCR程序。

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